EXclone简介
EXclone Kit是一款媲美Gateway系统的简便高效的克隆试剂盒,无需酶切,一个体系,一步反应即可实现: 1)将PCR片段快速定向克隆到任意EXclone载体;2)将目的片段从入门载体直接转移到任意目标载体。 EXclone系统提供强大的EXclone载体库,只需提供目标DNA片段或入门载体, 便可通过一步反应直接转移到任意EXclone载体,避免反复测序,一次克隆,解决所有。EXclone系统包含2个反应, 详细信息请参考EXclone说明书(PDF)。
---EXIN反应:将PCR片段一步克隆到包括入门载体pEXIN在内的任意EXclone载体
---EXTO反应:将入门载体pEXIN中的目标片段一步克隆到所需的任意EXclone载体
产品清单
Vector Type | Host | N-ter Tag(s) | C-ter Tag(s) | Resistance(s) |
---|---|---|---|---|
产品货号 | 产品名称 | 宿主 | 背景骨架 | N-ter Tag(s) | C-ter Tag(s) | 规格 | 单价 |
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EXclone特性
--简易 | 无需酶切,一管混合, 一步反应 |
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--方便 | 可将入门载体中的目标片段通过一步反应直接转移到任意EXclone载体,避免反复测序,一次克隆,解决所有 |
--快速 | 37oC反应30~60分钟即可 |
--高效 | 1000个以上的菌落数,>90%以上的阳性率,提供您所需的克隆 |
--灵活 | 同时用于入门克隆和亚克隆,兼容平末端和粘性末端 |
--集成 | 强大的EXclone载体库(涵盖适用于大肠杆菌、酵母、昆虫、植物、哺乳动物细胞等宿主的目的载体),只需提供克隆片段或入门克隆,便可高效快速构建任意EXclone载体,减少错误的产生 |
EXIN反应--将PCR片段一步克隆到任意EXclone载体
Step 1. 设计带有16-bp末端的引物,PCR扩增目标片段并纯化
Forward Primer: | 5- TCAGCAGTCGAAGAGC + (18-25 gene specific nucleotides) |
Reverse Primer: | 5- TTAGCGTGTGAAGAGC + (18-25 gene specific nucleotides) |
Step 2. 从EXclone载体库选择你要的入门载体或目标载体
Step 3. 建立EXIN反应体系
5X EX-Buffer | 2 µl |
EX-Vector | 2 µl |
EXclonase Enzyme | 1 µl |
Your Insert DNA | X* |
H2O | add to 10 µl |
*0.1-50 ng PCR片段
Step 4. 将反应体系混合后置于37oC孵育30分钟,然后于室温(20oC)继续放置15分钟
Step 5. 取5 µl反应液,参考标准步骤转化大肠杆菌
EXTO反应--将目标片段从入门载体一步转移到任意EXclone目标载体
Step 1. 制备含有目的片段的pEXIN质粒,建议稀释至10ng/µl
Step 2. 从EXclone载体库选择你的目标载体
Step 3. 建立EXTO反应体系
5X EX-Buffer | 2 µl |
EX-Vector | 2 µl |
EXclonase Enzyme | 1 µl |
pEXIN-Insert Donor plasmid | X* |
H2O | add to 10 µl |
*0.1-20 ng 含有目标片段的入门载体质粒
Step 4. 将反应体系混合后置于37oC孵育60分钟,然后于室温(20oC)继续放置15分钟
Step 5. 取5 µl反应液,参考标准步骤转化大肠杆菌