EXclone简介
EXclone Kit是一款媲美Gateway系统的简便高效的克隆试剂盒，无需酶切，一个体系，一步反应即可实现： 1）将PCR片段快速定向克隆到任意EXclone载体；2）将目的片段从入门载体直接转移到任意目标载体。 EXclone系统提供强大的EXclone载体库，只需提供目标DNA片段或入门载体， 便可通过一步反应直接转移到任意EXclone载体，避免反复测序，一次克隆，解决所有。EXclone系统包含2个反应, 详细信息请参考EXclone说明书(PDF)。
---EXIN反应：将PCR片段一步克隆到包括入门载体pEXIN在内的任意EXclone载体
---EXTO反应：将入门载体pEXIN中的目标片段一步克隆到所需的任意EXclone载体
产品清单
| Vector Type | Host | N-ter Tag(s) | C-ter Tag(s) | Resistance(s) |
|---|---|---|---|---|
| 产品货号 | 产品名称 | 宿主 | 背景骨架 | N-ter Tag(s) | C-ter Tag(s) | 规格 | 单价 |
|---|
EXclone特性
| --简易 | 无需酶切，一管混合， 一步反应 |
|---|---|
| --方便 | 可将入门载体中的目标片段通过一步反应直接转移到任意EXclone载体，避免反复测序，一次克隆，解决所有 |
| --快速 | 37oC反应30~60分钟即可 |
| --高效 | 1000个以上的菌落数，>90%以上的阳性率，提供您所需的克隆 |
| --灵活 | 同时用于入门克隆和亚克隆，兼容平末端和粘性末端 |
| --集成 | 强大的EXclone载体库（涵盖适用于大肠杆菌、酵母、昆虫、植物、哺乳动物细胞等宿主的目的载体），只需提供克隆片段或入门克隆，便可高效快速构建任意EXclone载体，减少错误的产生 |
EXIN反应--将PCR片段一步克隆到任意EXclone载体
Step 1. 设计带有16-bp末端的引物，PCR扩增目标片段并纯化
| Forward Primer: | 5- TCAGCAGTCGAAGAGC + (18-25 gene specific nucleotides) |
| Reverse Primer: | 5- TTAGCGTGTGAAGAGC + (18-25 gene specific nucleotides) |
Step 2. 从EXclone载体库选择你要的入门载体或目标载体
Step 3. 建立EXIN反应体系
| 5X EX-Buffer | 2 µl |
| EX-Vector | 2 µl |
| EXclonase Enzyme | 1 µl |
| Your Insert DNA | X* |
| H2O | add to 10 µl |
*0.1-50 ng PCR片段
Step 4. 将反应体系混合后置于37oC孵育30分钟，然后于室温(20oC)继续放置15分钟
Step 5. 取5 µl反应液，参考标准步骤转化大肠杆菌
EXTO反应--将目标片段从入门载体一步转移到任意EXclone目标载体
Step 1. 制备含有目的片段的pEXIN质粒，建议稀释至10ng/µl
Step 2. 从EXclone载体库选择你的目标载体
Step 3. 建立EXTO反应体系
| 5X EX-Buffer | 2 µl |
| EX-Vector | 2 µl |
| EXclonase Enzyme | 1 µl |
| pEXIN-Insert Donor plasmid | X* |
| H2O | add to 10 µl |
*0.1-20 ng 含有目标片段的入门载体质粒
Step 4. 将反应体系混合后置于37oC孵育60分钟，然后于室温(20oC)继续放置15分钟
Step 5. 取5 µl反应液，参考标准步骤转化大肠杆菌
苏公网安备 32041102000125号