百格CRISPR/Cas载体构建试剂盒

一步载体构建，直接遗传转化，数百次的成功实验验证

百格CRISPR/Cas载体构建试剂盒能够将gRNA靶点序列，通过一步反应，快速高效地构建至Cas9/gRNA质粒中，构建的质粒能够直接用于植物遗传转化。该载体的Cas9蛋白经密码子优化改造，采用拟南芥、大豆、水稻等植物的U6启动子表达gRNA序列。数百次的遗传转化实验表明，百格CRISPR/Cas载体都能够非常高效的植物的基因敲除和编辑。

产品特点

--简便	无需酶切，一步载体构建，直接用于遗传转化
--快速	20^oC反应30~60分钟即可
--高效	1000个以上的菌落数，95%以上的阳性率，提供您所需的克隆
--可靠	数百次的植物遗传转化实验，90%以上基因敲除成功率
--广泛	涵盖拟南芥、油菜、水稻、小麦和大豆等

产品组成

Package Buffer Anneal Vector-BGK-X Enzyme Mix	10T 300 µl 20 µl 10 µl

百格CRISPR/Cas载体

CRISPR/Cas载体BGK01

采用拟南芥U6启动子，能够高效的用于双子叶植物，特别是拟南芥
采用加强型CaMV启动子，高效表达Cas9蛋白
CaMV 35S启动子表达潮霉素抗性基因
100多次拟南芥基因敲除实验验证

CRISPR/Cas载体BGK015

采用拟南芥U6启动子，能够高效的用于双子叶植物，特别是拟南芥
采用加强型CaMV启动子，高效表达Cas9蛋白
CaMV 35S启动子表达草铵膦抗性基因
100多次拟南芥基因敲除实验验证

CRISPR/Cas载体BGK03

采用水稻U6启动子，能够高效的用于单子叶植物，特别是水稻
采用加强型玉米UBI启动子，高效表达Cas9蛋白
CaMV 35S启动子表达潮霉素抗性基因
300多次水稻基因敲除实验验证

CRISPR/Cas载体BGK041

采用大豆U6启动子，能够高效的用于双子叶植物，特别是大豆
采用加强型CaMV启动子，高效表达Cas9蛋白
CaMV 35S启动子表达草铵膦抗性基因
数十次大豆基因敲除实验验证

使用步骤

STEP 1. 设计并生成gRNA靶点序列。识别序列一般选择19bp，例如选择靶点序列CCCCTCGGACCTCTCCTCCAGG （红色AGG为PAM序列），则该靶点序列为CCCCTCGGACCTCTCCTCC。将19-bp靶点序列输入下面对话框，百格会为您自动生成与试剂盒对应的Oligo序列，您只要直接合成即可。

请输入19-bp靶点序列	选择载体		生成Oligo 序列 (5'-3')
		UP: LOW:
构建后的载体上下游DNA序列 5’-3’(可用于测序序列比对)

STEP 2. 制备Oligo二聚体。将合成的Oligo加水溶解至10 µM，按下列反应体系混合后，95^oC加热3分钟，然后以约0.2^oC/秒缓慢降至20^oC （推荐采用PCR仪）。

Buffer Anneal UP Oligo Low Oligo H2O	18 µl 1 µl 1 µl Add to 20 µl

STEP 3. 将Oligo二聚体构建至CRISPR/Cas载体。按下列反应体系在冰上混合各个组分，混匀后室温（20^oC）反应1小时。

CRISPR/Cas Vector Oligo 二聚体 Enzyme Mix H2O	2 µl 1 µl 1 µl Add to 10 µl

STEP 4. 参考标准步骤转化大肠杆菌。